ADN recombinante

ADN RECOMBINANTE.

La tecnología del DNA recombinante es un campo relativamente extenso de la Biología molecular que ha permitido realizar grandes avances en el conocimiento de la estructura y función del material hereditario. Comprende un conjunto de técnicas que permiten realizar el análisis estructural y fisiológico de los elementos genéticos.Destacamos los diferentes pasos a seguir en un experimento de clonado de DNA por medio de plásmidos bacterianos.


DISEÑO GENERAL DE UN EXPERIMENTO DE CLONADO



Un experimento de clonado de DNA consiste, esencialmente, en extraer de un contexto genético y celular complejo, grande y poco conocido un fragmento de DNA de interés, y colocarlo en un contexto sencillo y bien conocido. Desde el punto de vista molecular, el DNA de interés se inserta en un vector. Desde el punto de vista celular, la molécula recombinante se introduce, mantiene y amplifica en células bacterianas, generalmente Escherichia coli.
Las distintas etapas a seguir en un experimento de clonado, de las cuales algunas se desarrollan in vitro y otras in vivo, son:
1- Purificación de los DNAs a partir de las células portadoras del plásmido vector y de las células portadoras de la molécula de DNA de interés.
2- Digestión de los DNAs con una misma enzima de restricción. Se digieren por un lado el plásmido vector, y por otro, la molécula que contiene el fragmento de interés (inserto).
3- Ligación con DNA ligasa de los DNAs digeridos. Éstos se mezclan y se les añade DNA ligasa. De este modo, se obtienen moléculas recombinantes integradas por el vector más un inserto.
4- Transformación de células competentes bacterianas (célula receptora) con la mezcla de ligación.
5- Selección de los clones transformantes (resistencia antibiótica). Se realiza mediante la siembra de la mezcla de transformación en un medio selectivo para los clones que hayan sido transformados con por lo menos el DNA del vector.
6- Detección de los clones recombinantes. Permite distinguir los clones transformantes que recibieron una molécula recombinante (vector + inserto) de aquellos que sólo recibieron el vector.
7-Análisis de los DNAs plasmídicos de los clones recombinantes.. Se procede a la extracción del DNA plasmídico de los clones recombinantes detectados y a su análisis electroforético. Es útil, para poder comparar, contar con alícuotas de los DNAs de cada una de las etapas.

CONCLUSIONES:

El producto de las técnicas del DNA recombinante es un segmento de DNA clonado, que ahora forma parte de una molécula quimérica pequeña y se encuentra en una estirpe celular muy conocida y de alta tasa de multiplicación, generalmente Escherichia coli. En este contexto, el segmento de DNA de interés es muy accesible a su estudio en múltiples direcciones.